石榴皮多酚抑菌活性研究及应用

本书系统介绍了石榴和石榴皮资源概况，石榴皮多酚的组成、生物活性及提纯化方法，重点介绍了石榴皮多酚中的主要成分安石榴苷对金黄色葡萄球菌的抑菌作用，包括对细菌细胞壁膜完整性、毒力因子表达、生物膜形成和胞内蛋白质表达的影响，并对石榴皮多酚在食品防腐保鲜、医药、纺织等领域的应用情况进行了深入介绍，反映了石榴皮多酚抑菌活性及应用的最新研究成果。

本书可供食品科学、生物医药等领域的教学科研人员、研究生以及相关企业的研发人员等参考使用。

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第1章 概述 1
1.1 石榴资源概况 1
1.2 石榴皮的生物活性成分 2
1.3 石榴皮多酚的生物活性作用 4
1.3.1 抗氧化作用 4
1.3.2 抑菌作用 5
1.3.3 抗病毒作用 6
1.3.4 心血管保护作用 6
1.3.5 抗炎作用 7
1.3.6 抗肿瘤作用 7
1.4 石榴皮多酚的提取方法 8
1.4.1 溶剂萃取法 8
1.4.2 超声波辅助提取法 8
1.4.3 微波辅助提取法 9
1.4.4 超临界流体萃取法 10
1.5 石榴皮多酚的安全性 10
参考文献 11

第2章 石榴皮多酚的提取、纯化及抑菌活性初探 16
2.1 引言 16
2.2 材料与方法 18
2.2.1 试剂与仪器 18
2.2.2 石榴皮单宁的提取 20
2.2.3 石榴皮单宁的纯化 20
2.2.4 高效液相色谱分析 21
2.2.5 抑菌效果研究 22
2.3 结果与分析 23
2.3.1 液相色谱检测石榴皮提取物的成分及含量 23
2.3.2 抑菌效果评价 25
2.4 小结 27
参考文献 28

第3章 安石榴苷对金黄色葡萄球菌细胞膜完整性及细胞形态的影响 31
3.1 引言 31
3.2 材料与方法 32
3.2.1 试剂与仪器 32
3.2.2 最小抑菌浓度的测定 35
3.2.3 生长曲线的测定 36
3.2.4 膜电位的测定 37
3.2.5 钾离子流出的测定 37
3.2.6 扫描电子显微镜观察 38
3.2.7 透射电子显微镜观察 38
3.3 结果与分析 40
3.3.1 最小抑菌浓度 40
3.3.2 安石榴苷对细菌生长的影响 40
3.3.3 安石榴苷对膜电位的影响 41
3.3.4 安石榴苷对钾离子流出的影响 42
3.3.5 扫描电子显微镜图谱 43
3.3.6 透射电子显微镜图谱 44
3.4 小结 45
参考文献 47

第4章 安石榴苷对金黄色葡萄球菌毒力因子表达的影响 51
4.1 引言 51
4.2 材料与方法 54
4.2.1 试剂与仪器 54
4.2.2 菌种活化及菌悬液制备 56
4.2.3 菌落计数 56
4.2.4 溶血活性的测定 57
4.2.5 凝固酶效价的测定 58
4.2.6 总肠毒素的检测 58
4.2.7 qRT-PCR 59
4.3 结果与分析 63
4.3.1 安石榴苷对细菌生长的影响 63
4.3.2 安石榴苷对金黄色葡萄球菌溶血活性的影响 64
4.3.3 安石榴苷对金黄色葡萄球菌凝固酶表达的影响 65
4.3.4 安石榴苷对金黄色葡萄球菌总肠毒素表达的影响 65
4.3.5 安石榴苷对金黄色葡萄球菌毒力基因表达的影响 66
4.4 小结 71
参考文献 72

第5章 亚致死浓度下安石榴苷对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响 75
5.1 引言 75
5.2 材料与方法 80
5.2.1 试剂与仪器 80
5.2.2 菌种活化及菌悬液制备 83
5.2.3 亚抑菌浓度下生长曲线的测定 83
5.2.4 结晶紫染色法检测安石榴苷对生物膜形成的影响 84
5.2.5 MTT染色法检测安石榴苷对生物膜代谢的影响 85
5.2.6 生物膜中活菌的计数 85
5.2.7 扫描电镜观察生物膜的形态 85
5.2.8 激光共聚焦显微镜观察生物膜的形态 86
5.2.9 细菌表面疏水率测定 87
5.2.10 qRT-PCR 87
5.3 结果与分析 91
5.3.1 亚抑菌浓度的安石榴苷对细菌生长的影响 91
5.3.2 结晶紫染色法反映的抗生物膜效果 92
5.3.3 MTT染色法显示的抗生物膜效果 94
5.3.4 生物膜中活菌的数量 94
5.3.5 扫描电镜观察安石榴苷对金黄色葡萄球菌生物膜的影响 96
5.3.6 激光共聚焦显微镜观察安石榴苷对金黄色葡萄球菌生物膜的影响 97
5.3.7 安石榴苷对金黄色葡萄球菌表面疏水率的影响 98
5.3.8 安石榴苷对金黄色葡萄球菌生物膜相关基因转录水平的影响 99
5.4 小结 102
参考文献 104

第6章 亚致死浓度下安石榴苷对金黄色葡萄球菌蛋白组表达的影响 108
6.1 引言 108
6.2 材料与方法 114
6.2.1 试剂与仪器 114
6.2.2 蛋白质的提取与定量 116
6.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 118
6.2.4 蛋白质的消化 118
6.2.5 多肽的脱盐纯化与定量 119
6.2.6 多肽的标记 119
6.2.7 液相色谱-质谱联用分析 122
6.2.8 蛋白质鉴定及数据库查询 123
6.2.9 生物信息学分析 124
6.3 结果与分析 125
6.3.1 安石榴苷对金黄色葡萄球菌生长的抑制作用 125
6.3.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱分析 126
6.3.3 蛋白质定量与聚类分析 127
6.3.4 蛋白质的细胞定位 128
6.3.5 表达量显著降低的蛋白 128
6.3.6 表达量显著增加的蛋白 137
6.3.7 安石榴苷对金黄色葡萄球菌代谢通路的影响 140
6.3.8 蛋白相互作用分析 146
6.4 小结 148
参考文献 154

第7章 石榴皮多酚的应用 157
7.1 在食品防腐保鲜领域的应用 157
7.2 在其他领域的应用 159
参考文献 161