口腔分子生物学实验技术指导

暂无

第一章

口腔分子生物学概述/ 1

第一节 分子生物学/ 2

第二节 口腔分子生物学/ 3

第三节 口腔分子生物学研究意义/ 4

第二章

核酸提取与分离技术/ 5

第一节 基因组DNA 提取技术/ 6

一、口腔细菌DNA 提取/ 6

二、口腔真菌DNA 提取/ 9

三、口腔组织或细胞基因组DNA 提取/ 11

四、石蜡包埋组织DNA 提取/ 13

第二节 RNA 提取技术/ 16

一、总RNA 提取/ 17

二、mRNA 提取/ 18

三、小分子RNA 提取/ 21

第三章PCR 技术/ 25

第一节 RT-PCR 技术/ 26

一、常规RT-PCR 技术/ 26

二、温度梯度RT-PCR 技术/ 29

第二节 荧光定量PCR 技术/ 30

一、染料法/ 31

二、探针法/ 33

第三节 数字PCR 技术/ 35

第四章电泳与杂交技术/ 37

第一节 电泳技术/ 38

一、琼脂糖凝胶电泳技术/ 38

二、聚丙烯酰胺凝胶电泳技术/ 40

三、变性梯度凝胶电泳技术/ 42

第二节 杂交技术/ 44

一、Southern 印迹杂交技术/ 44

二、Northern 印迹杂交技术/ 48

第五章分子克隆技术/ 53

第一节 制备目标DNA/ 54

一、核酸纯化技术/ 54

二、反转录cDNA 构建/ 56

第二节 限制性内切酶消化/ 57

一、限制性酶切反应/ 58

二、PCR 扩增产物/ 58

三、感受态细胞的制备技术/ 59

第三节 DNA 重组技术/ 60

一、连接反应/ 61

二、验证重组质粒/ 61

第六章基因编辑技术/ 65

第一节 同源重组技术/ 66

第二节 基因工程核酸酶技术/ 71

一、锌指核酸酶技术/ 71

二、转录激活因子样效应物核酸酶技术/ 74

三、CRISPR/Cas 技术/ 76

第七章蛋白质提取技术/ 80

第一节 细胞全蛋白提取技术/ 81

一、表面活性剂法提取细胞全蛋白技术/ 81

二、差异去垢剂分离法细胞蛋白技术/ 82

第二节 细胞膜蛋白提取技术/ 85

一、注射器针头机械破膜法/ 85

二、反复冻融破膜法/ 86

三、蔗糖密度梯度离心法/ 87

第三节 细胞质蛋白提取技术/ 88

差速离心法/ 88

第四节 细胞核蛋白提取技术/ 89

一、差速离心法/ 90

二、蔗糖梯度密度离心法/ 91

第五节 细胞分泌蛋白提取技术/ 92

一、超滤法/ 92

二、沉淀法/ 93

三、透析法/ 94

第八章蛋白质分析与定量技术/ 97

第一节 蛋白质印迹技术/ 98

第二节 酶联免疫吸附技术/ 100

第三节 紫外吸收技术/ 101

第四节 凯氏定氮技术/ 102

第九章蛋白质表达纯化技术/ 105

第一节 蛋白质表达技术/ 106

一、蛋白质大肠杆菌表达技术/ 106

二、蛋白质酵母表达技术/ 113

三、蛋白质昆虫细胞表达技术/ 116

四、蛋白质哺乳动物细胞表达技术/ 119

第二节 蛋白质纯化技术/ 122

一、亲和柱纯化/ 122

二、离子交换柱纯化/ 124

三、分子筛纯化/ 126

第十章色谱分离技术/ 129

第一节 气相色谱/ 130

一、气相色谱的基本理论/ 130

二、气相色谱的组成部件/ 131

三、气相色谱的潜在应用/ 132

第二节 液相色谱/ 135

一、高效液相色谱法的基本理论/ 135

二、高效液相色谱法的基本组成/ 136

三、高效液相色谱固定相和流动相/ 137

四、高效液相色谱法的潜在应用/ 139

第十一章生物大分子相互作用检测技术/ 142

第一节 蛋白质相互作用检测技术/ 143

一、免疫共沉淀技术/ 143

二、酵母双杂交技术/ 145

第二节 染色质免疫共沉淀技术/ 149

第十二章流式细胞术/ 154

第一节 常规抗体染色技术/ 155

一、细胞表面蛋白分子染色技术/ 155

二、细胞内蛋白分子染色技术/ 160

第二节 细胞内DNA 染色常用技术/ 165

一、细胞凋亡检测技术/ 165

二、细胞周期检测技术/ 168

第十三章基因组学技术/ 174

第一节 全基因组测序与全外显子测序/ 175

一、全基因组测序/ 175

二、全外显子测序/ 178

第二节 全基因组关联分析/ 179

第三节 转录组测序/ 181

第四节 芯片技术/ 185

一、RNA 表达谱芯片/ 185

二、microRNA 芯片/ 186

三、circRNA 芯片/ 187

第十四章蛋白质组学技术/ 188

第一节 凝胶依赖的蛋白质组学策略/ 189

双向电泳技术/ 190

第二节 非凝胶系统的蛋白质组学策略/ 201

一、稳定同位素氨基酸细胞培养技术/ 202

二、同位素编码的亲和标签技术/ 202

三、相对和绝对定量同位素标记技术/ 203

四、多重反应监测技术/ 203

五、平行反应监测技术/ 204

六、数据非依赖采集技术/ 204

第十五章口腔代谢组学方法/ 205

第一节 代谢组学简介/ 206

一、样本制备/ 206

二、代谢产物检测和数据采集/ 207

三、数据分析与模型建立/ 209

第二节 代谢组学的数据处理/ 210

一、数据预处理/ 210

二、数据处理方法/ 211

三、特征性代谢物及通路分析/ 212

第三节 代谢组学技术在口腔疾病方面的应用/ 213

一、口腔黏膜癌变的SD 大鼠血浆代谢标志物的解析/ 213

二、尿液代谢标志物的解析/ 217

三、口腔微生物细胞外代谢标志物解析/ 219

四、口腔先天畸形代谢标志物解析/ 220

五、口腔生物材料的代谢标志物解析/ 221

生物信息学分析技术/ 224

第一节 生物信息学概述/ 225

一、生物信息学的发展与内涵/ 225

二、生物信息学与精准医学/ 228

三、生物信息学入门指引/ 229

第二节 基因组学综合资源库/ 233

一、美国国立生物技术信息中心/ 233

二、UCSC Genome Browser/ 238

三、Ensembl/ 241

第三节 分子生物学常用数据库/ 243

一、基因集注释/ 244

二、基因表达数据库/ 247

三、人类基因数据库/ 249

第四节 常用生物信息学工具与应用/ 250

一、生物信息学分析平台/ 250

二、文献检索工具/ 251

三、序列搜索工具/ 253

参考文献/ 255